İlk növbədə, həm EcoR1, həm də Xba1 DNT-ni həzm etdikdə (Nde1 kimi) 5' çıxıntılar buraxır. Hər iki halda 3' ucu girintilidir, buna görə də poliermaza əsaslar əlavə edə bilər. İkincisi, bütün polimerazlar yalnız 3' ucuna əsaslar əlavə edə bilər, beləliklə, Klenow küt uclar yaratmaq üçün hər iki sahənin 3' ucuna 4 əsas əlavə edəcək.
Məhdudiyyət fermentləri 5 fosfat buraxırmı?
Restriksiya fermentləri tərəfindən həzm olunan vektorlar və əlavələr lazımi terminal modifikasiyalarını (5' fosfat və 3' hidroksil) ehtiva edir, Polimeraza Zəncirvari Reaksiya (PZR) tərəfindən yaradılmış fraqmentlər isə olmaya bilər.
Küt ucları bağlamaq olar?
Küt ucun liqasiyası
Küt ucun liqasiyası çıxıntılı ucların əsas cütləşməsini nəzərdə tutmur, buna görə hər hansı küt uc digər küt uca bağlana bilər. Küt uclar SmaI və EcoRV kimi məhdudlaşdırıcı fermentlər tərəfindən yaradıla bilər.
Taq polimeraza küt uçlar əmələ gətirirmi?
Bəli… PCR-də son uzatma addımını 72 dC-də saxlasanız, Taq Polimeraz A-Çıxışları əlavə edir. Əsasən TA Klonlaması üçün istifadə olunur.
Niyə DNT ardıcıllığında Klenow fraqmentindən istifadə olunur?
Klenow fraqmenti tədqiqata əsaslanan tapşırıqlar üçün son dərəcə faydalıdır, məsələn: Tək zəncirli şablonlardan ikizəncirli DNT-nin sintezi . 5' çıxıntını küt etmək üçün DNT fraqmentlərinin geri çəkilmiş 3' uclarının doldurulması . Çıxılmış 3' çıxıntılar həzm olunur.
