Hüceyrələr ayrıldıqdan sonra tripsini təsirsiz hala gətirmək üçün 2 cild əvvəlcədən isidilmiş tam böyümə mediası əlavə edin. Hüceyrələrin >95%-nin bərpasını təmin etmək üçün hüceyrə qatının səthinə bir neçə dəfə pipet vuraraq mühiti yumşaq bir şəkildə dağıtın.
Tripsin fəaliyyətini necə dayandırmaq olar?
Tripsinin həzmini dondurmaqla və ya qarışqa, sirkə və ya trifluoroasetik turşu əlavə etməklə reaksiyanın pH-nı pH 4-dən aşağı salmaqla dayandırıla bilər (tripsin aktivliyini bərpa etdikdə pH pH 4-dən yuxarı qalxır). Həzm olunan nümunələr -20°C-də saxlanıla bilər.
Tripsini zərərsizləşdirən nədir?
Tərkibində kalsium və maqnezium ionları olan tampon də tripsin fəaliyyətini yavaşladır. Bununla belə, FBS tripsin fəaliyyətini maneə törətməyin daha təsirli yoludur.
Sərum tripsini təsirsiz hala gətirirmi?
Zərdab böyrəklərin fermentativ həzmindən qalan qalıq tripsini və sonradan hüceyrələr tərəfindən sintez edilən proteolitik fermentləri təsirsiz hala gətirir. Təzə tripsinləşdirilmiş hüceyrələr, qalıq tripsini çıxarmaq üçün təkrar yuyulmaq şərti ilə, serum olmadıqda monolaylara çevrilə bilər.
Tripsini deaktiv etmək üçün nə qədər media lazımdır?
Tripsininizlə ən azı 1:1 nisbətində 5-10% serum tərkibli mühitdənistifadə etdiyiniz müddətcə kifayət qədər inhibə olmalı, sonra sentrifuqalama aparılmalıdır. və təzə mühitlə orta mübadilə.
