Tripsinizləşmə, zülalları parçalayan proteolitik ferment olan tripsindən istifadə edərək, yapışan hüceyrələri yetişdirildikləri damardan ayırmaq üçün hüceyrə dissosiasiya prosesidir. Hüceyrə mədəniyyətinə əlavə edildikdə, tripsin hüceyrələrin damara yapışmasını təmin edən zülalları parçalayır.
Hüceyrələri niyə Tripsizləşdiririk?
Tripsizləşdirmə çox vaxt hüceyrələrin yeni konteynerə keçidinə icazə vermək, təcrübə üçün müşahidə aparmaq və ya bir faizi çıxarmaqla kolbada birləşmə dərəcəsini az altmaq üçün edilir. hüceyrələr.
Tripsin hüceyrələri ayırmaq üçün necə işləyir?
Tripsin/EDTA hüceyrələri ayırmaq üçün birləşmiş üsuldur. Tripsin yuxarı axın amin turşusuprolin deyilsə, yapışma zülallarının amin turşusunu xüsusi olaraq C-terminalında lizin və ya aginində kəsərək hüceyrə-hüceyrə və hüceyrə-matris qarşılıqlı əlaqədə yapışma zülallarını kəsir.
Tripsinizləşdirilmiş yapışqan hüceyrələri necə əldə edirsiniz?
Prosedur
- Aspirasiya yolu ilə mühiti mədəni qabdan çıxarın və monolayı Ca2+ və Mg olmayan duz məhlulu ilə yuyun. Serumun bütün izlərini silmək üçün 2+. …
- Hüceyrələrin monoqatını tamamilə örtmək üçün mədəniyyət qabına(lar)ına kifayət qədər tripsin və ya tripsin/EDTA məhlulu tökün və ~2 dəqiqə ərzində 37 °C inkubatora qoyun.
Hüceyrə mədəniyyətində tripsini necə söndürə bilərəm?
Xüceyrələr ayrıldıqdan sonra 2 cild əlavə edin tripsini inaktiv etmək üçün əvvəlcədən isidilmiş tam böyümə mühiti. Hüceyrələrin >95%-nin bərpasını təmin etmək üçün hüceyrə qatının səthi üzərində bir neçə dəfə pipetləmə yolu ilə mühiti yumşaq bir şəkildə dağıtın. Serumsuz mədəniyyətlər üçün, soya tripsin inhibitoru (Məhsul No.
