Həmçinin nümunənizi əvvəlki həcmin onda 1 hissəsinə qədər ultrasüzgəcdən keçirərək duzsuzlaşdıra bilərsiniz, bu da yenidən durulaşdırılıb UF addımını təkrarlayın. Duzsuzlaşdırma üçün ən yaxşı üsul ultrasüzgəcdən (klassik, mərkəzdənqaçma deyil) 50 mM bufer qarşı gel filtrasiyası iləduzsuzlaşdırmadır.
Zülalların təmizlənməsində duzsuzlaşdırma nədir?
Duzsuzlaşdırma protein məhlullarındanduzları, nuklein turşularından fenol və ya korporasiya olunmamış nukleotidləri və ya birləşdirilmiş zülallardan artıq çarpaz əlaqə və ya etiketləmə reagentlərini çıxarmaq üçün istifadə olunur.
Zülalları necə təmizləyirsiniz?
Toplu zülalların təmizlənməsində zülalları təcrid etmək üçün ümumi ilk addım ammonium sulfatla çökmə (NH4) 2SO4. Bu, artan miqdarda ammonium sulfat əlavə etməklə və çökmüş zülalın müxtəlif fraksiyalarını toplamaqla həyata keçirilir. Sonradan ammonium sulfat dializ vasitəsilə çıxarıla bilər.
Mübadilə zülallarını necə bufer edirsiniz?
Bufer mübadiləsi ilk olaraq nümunənin daxil olması lazım olan buferlə sütun qatranı ilə tarazlaşdırılmaqla həyata keçirilir. Hər iki halda nümunəni içəriyə daşıyan tampon tərkib hissələri sütun, sütunun əvvəlcədən tarazlaşdırıldığı məhlulla əvəz olunacaq.
Aşağıdakı xromatoqrafiya texnikasından hansı zülalların duzsuzlaşdırılması üçün tətbiq oluna bilər?
Yuxarıda qeyd edildiyi kimi, gel filtrasiyası zülal üçün effektiv şəkildə istifadə edilə bilər.duzsuzlaşdırma və əvvəlcə gel filtrasiya sütununun su ilə balanslaşdırılması ilə həyata keçirilir. Bununla belə, bufer mübadiləsi əvvəlcə sütun qatranını hədəf tamponla tarazlaşdırmaqla həyata keçirilir.
